藏红花素调控lncRNA TTTY15/let-7c-5p通路保护帕金森病细胞损伤模型机制研究

作者：黄宁宁; 喻跃国; 王晓蓉

来源：新中医, 2020, 52(19): 14-20.

DOI：10.13457/j.cnki.jncm.2020.19.004

• 藏红花素
• 帕金森病
• 细胞损伤
• TTTY15
• let-7c-5p
• 1-甲基-4-苯基-吡啶离子

目的:探讨藏红花素对帕金森病细胞损伤模型的影响和可能机制。方法:不同浓度(10、50、100μmol/L)的藏红花素作用于1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SK-N-SH细胞,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测长链非编码RNA (lncRNA)睾丸特异性转录Y-连锁15 (TTTY15)和微小RNA (miRNA) let-7c-5p的表达水平。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定TTTY15和let-7c-5p之间的靶向关系。分别转染TTTY15小干扰RNA (si-TTTY15)、let-7c-5p模拟物至人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH),采用上述方法检测敲低TTTY15或过表达let-7c-5p对MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的影响。结果:与Con组比较,MPP+组SK-N-SH细胞MDA含量升高,GSH含量显著降低(P<0.05);与MPP+组比较,MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组SK-N-SH细胞MDA含量降低,GSH含量升高(P<0.05)。MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组3组MDA、GSH变化与藏红花素剂量相关,MDA随剂量增加而降低,GSH随剂量增加而升高(P<0.05)。与Con组比较,MPP+组SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与MPP+组比较,MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组之间各检测指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与Con组比较,MPP+组SK-N-SH细胞TTTY15表达升高,let-7c-5p表达降低(P<0.05);与MPP+组比较,MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组SK-N-SH细胞TTTY15表达降低,let-7c-5p表达升高(P<0.05)。MPP++crocin-L组、MPP++crocin-M组、MPP++crocin-H组各指标组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,let-7c-5p组WT-TTTY15的SK-N-SH细胞荧光素酶活性降低(P<0.05);miR-NC组与let-7c-5p组MUT-TTTY15的SK-N-SH细胞荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-TTTY15组SK-N-SH细胞let-7c-5p表达降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-TTTY15组SK-N-SH细胞let-7c-5p表达升高(P<0.05)。与MPP++si-NC组比较,MPP++si-TTTY15组SK-N-SH细胞TTTY15的表达水平降低,凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量降低,Bcl-2蛋白表达、GSH含量升高(P<0.05)。与MPP++NC组比较,MPP++let-7c-5p组SK-N-SH细胞let-7c-5p的表达水平升高,凋亡率、Bax蛋白表达、MDA含量降低,Bcl-2蛋白表达、GSH含量升高(P<0.05)。结论:藏红花素对帕金森病细胞损伤模型具有保护作用,其机制可能与下调lncRNA TTTY15/let-7c-5p通路有关。

• 单位
  金华市第二医院