溶质载体家族成员SLC25A39基因促进乳腺癌细胞线粒体分裂

作者：符静; 薛春源; 朱祥; 霍楠; 丛瑞; 孙志佳; 亢小峰; 闫志风^*; 徐小洁^*

来源：军事医学, 2022, 46(04): 280-284.

DOI：10.7644/j.issn.1674?9960.2022.04.008

• 线粒体溶质载体蛋白SLC25A39
• 真核表达
• 人乳腺癌细胞ZR75-1
• 线粒体分裂

目的 构建带Flag标签的人溶质载体家族成员蛋白SLC25A39基因的真核表达载体，在获得FlagSLC25A39融合蛋白表达后，研究SLC25A39表达对人乳腺癌细胞线粒体稳态的影响。方法 以人乳腺文库为模板采用PCR技术扩增出人SLC25A39的编码区序列，双酶切后将其插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，菌液PCR鉴定阳性的克隆再进行质粒提取，测序正确后将重组质粒与空载体分别转染人乳腺癌细胞ZR75-1。Western印迹鉴定SLC25A39目的基因的表达；Mitotracker对乳腺癌细胞的线粒体进行染色，共聚焦显微镜对线粒体进行观察；Western印迹检测线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达变化。结果双酶切鉴定表明，Flag-SLC25A39真核表达载体构建成功；Western印迹验证SLC25A39基因表达成功；激光共聚焦显微镜下观察发现SLC25A39过表达的乳腺癌ZR75-1细胞分裂的线粒体较多；Western印迹证实SLC25A39基因过表达后线粒体分裂蛋白Fis1表达增高，线粒体融合蛋白Mfn1表达减弱。结论 成功构建带Flag标签的SLC25A39基因真核表达载体，该基因可促进人乳腺癌细胞的线粒体分裂，有望成为靶向线粒体治疗乳腺癌的潜在新靶点。

• 单位
  解放军总医院; 首都医科大学附属北京朝阳医院