骨肉瘤组织中circ0000880表达及其对细胞增殖的影响

作者：李劲峰; 苏会芳; 尚国伟; 陈松峰; 姬彦辉; 冷子宽; 王义生; 刘宏建^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(08): 1553-1556.

• 骨肉瘤细胞
• 环状RNA
• 高通量测序
• 细胞增殖

目的观察骨肉瘤组织和细胞株中环状RNA circ0000880表达, 及其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤的标本共16例, 采用circRNA高通量测序技术检测表达差异的circRNA。提取骨肉瘤及其癌旁组织总RNA, 依据circ0000880序列, 设计divergent primer, 扩增包含backsplice junction区域片段, 随后连接入pGM-T载体进行测序鉴定。采用SYBR Green荧光定量PCR, 分别检测骨肉瘤及其癌旁组织, 骨肉瘤细胞MG63、SAOS-2、U2OS及正常人成骨细胞hFOB1.19中circ0000880的表达水平。将circ0000880小干扰RNA(siRNA)和circ0000880 NC慢病毒转染至骨肉瘤细胞后检测细胞中circ0000880的表达水平, 并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及克隆形成实验检测对骨肉瘤细胞增殖的影响。两样本两组间比较用t检验。结果采用circRNA高通量测序技术检测结果显示骨肉瘤组织及细胞中circ0000880的表达显著上调, 并通过测序鉴定证实circ0000880在骨肉瘤组织中存在、且为环状RNA。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示circ0000880在骨肉瘤组织中的表达量(2.032±0.165)显著高于其癌旁组织(1.105±0.155, t=16.393, P<0.05)。circ000088在骨肉瘤细胞系MG63(2.252±0.140)、SAOS-2(2.134±0.176)、U2OS(2.011±0.226)中表达量均显著高于正常人成骨细胞(1.000±0.092, F=71.299, P<0.05)。转染circ0000880 siRNA的MG63细胞中circ0000880表达量明显下降(0.646±0.058), 转染circ0000880 NC的MG63细胞中circ0000880表达水平(1.005±0.121)与空白组(1.000±0.201)比较差异无统计学意义(F=17.977, P<0.05)。CCK-8及克隆形成试验结果显示, 与空白组和阴性对照组比较, 转染circ0000880 siRNA的骨肉瘤细胞增殖能力显著受到抑制。结论骨肉瘤组织及细胞中circ0000880表达显著上调, 敲低circ0000880表达可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖能力。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室