木薯MeLOB36基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体构建及验证

作者：阳慧; 张彤; 王亚杰; 陆小花; 刘姣; 李瑞梅; 郭建春; 耿梦婷; 姚远

来源：分子植物育种, 2023, 21(11): 3612-3618.

DOI：10.13271/j.mpb.021.003612

• 木薯
• 转录因子
• MeLOB36基因
• 基因编辑

LBD基因家族是指含有侧生器官边界(lateral organ boundaries, LOB)结构域的一种植物特异性转录因子家族，在植物的生长发育和代谢调控等方面起着至关重要的作用。木薯MeLOB36基因是LBD基因家族成员，前期研究发现该基因在木薯根尖、体细胞胚、脆性胚性愈伤组织表达量较高，推测其参与了木薯植株的形态建成。为了鉴定MeLOB36基因的功能，本研究利用在线软件CRISPR-P v2.0在保守区域设计靶标MeLOB36基因的sg RNA，构建MeLOB36基因的编辑载体pCAMBIA1301-Cas9-MeLOB36-sg RNA。将重组载体转化LBA4404根癌农杆菌后侵染木薯脆性胚性愈伤组织，通过PCR扩增MeLOB36基因编辑靶点及潜在脱靶位点区段序列，进行Sanger测序。结果表明，MeLOB36基因被成功编辑，且未脱靶。本研究有助于进一步获得MeLOB36基因的突变体，从而鉴定MeLOB36转录因子对木薯植株形态建成的影响。

• 单位
  海南大学; 生命科学学院; 中国热带农业科学院热带生物技术研究所