TRKC基因体外转染大鼠神经干细胞的方法

作者：梁日生; 周良辅; 张荣; 毛颖; 吴惺; 杨卫忠

来源：基础医学与临床, 2006, 26(11): 1239-1243.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6325.2006.11.016

• 神经营养素-3
• 酪氨酸激酶C
• 神经干细胞
• 基因转染

目的 探讨体外转染TRKC基因的神经干细胞的制备方法.方法 利用自行合成的引物进行PCR反应,定向克隆构建TRKC-cDNA质粒并进行DNA测序分析,将pEGFP-C1质粒和TRKC-cDNA质粒进行酶切、重组,构建出pEGFP-C1-TRKC质粒.用脂质体将重组质粒转染到体外培养的大鼠神经干细胞中.用Western blot、免疫荧光和MTr法观察转染基因的表达和转基因后神经干细胞的增殖活性.结果 成功构建了TRKC-cDNA质粒,DNA测序证明所获得的目的基因与公布序列的一致性为99%,所获得的重组子符合研究要求.pEGFP-C1-TRKC质粒转染到神经干细胞后,宿主细胞能高效、稳定地表达目的基因产物GFP和TRKC.在NT-3作用下转TRKC基因神经干细胞的增殖活性有明显增强.结论 以质粒为载体、脂质体为介导可成功地把TRKC基因转染到神经干细胞内,转染基因表达好且具有功能.

• 单位
  协和医院; 复旦大学; 福建医科大学