PIK3CA基因突变数字PCR参考测量方法研究

作者：王蕾蕾; 王霞; 邢德纯; 董莲华^*; 杨靖亚^*

来源：计量学报, 2023, 44(03): 368-376.

• 计量学
• PIK3CA
• 基因突变
• 数字PCR
• 定量

PIK3CA突变检测是实现肿瘤个体化治疗的重要预测因子。以PIK3CA为目的基因，选择E542K、E545K、H1047R三个热点突变，建立对其准确定量检测的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)方法。优化退火温度、引物探针浓度等条件，对方法特异性、线性范围、重复性等方面进行考察。结果表明，建立的ddPCR检测方法精密度好，在突变丰度(0.05～82.75)%范围内相对标准偏差值介于(0.392～14.031)%,准确性高，与重量法的相关系数达到99.91%、99.98%、99.94%;在突变丰度0.2%以上，方法的重复性可达5%以内；在突变丰度0.2%以下，重复性保持在15%以下。在20μL反应体系中3个热点突变的空白限分别为0.03%、 0.04%、0.04%,检测下限和定量下限均为0.05%。因此，所建立的PIK3CA基因E542K、E545K及H1047R位点突变的ddPCR参考测量灵敏度高，重复性好，在癌症诊断、个体化用药指导和预后方面具有良好的应用。

• 单位
  中国计量科学研究院; 上海海洋大学