表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立

作者：崔佳; 温炟; 孙燚; 杨国凤; 吴长新^*

来源：中国病原生物学杂志, 2021, 16(09): 997-1007.

DOI：10.13350/j.cjpb.210902

• 卡介苗
• 荧光蛋白
• qPCR
• 定量细菌数

目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin, BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。

• 单位
  山西大学; 长治医学院