靶向CD96/PD1双特异性抗体的构建与鉴定

作者：马佳兵; 赵文旭; 徐艳敏; 沈俊杰; 陈雪娇; 田茂鲜; 钱程^*

来源：免疫学杂志, 2022, 38(03): 269-276.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.2022038

• CD96
• PD1
• 双特异性抗体
• 肿瘤免疫治疗
• Knobs-into-holes

目的 构建可以同时靶向免疫检查点分子CD96和PD1(programmed cell death protein 1)的双特异性抗体，为肿瘤免疫治疗提供一种新的思路。方法 构建表达抗CD96和PD1的ScFv-Fc结构的质粒，使用CHO真核表达系统生产抗体。经过Protein A纯化后，使用SDS-PAGE和分子排阻色谱鉴定抗体。外源构建CHO-PD1和293T-CD96 2种靶细胞，流式细胞术检测CD96和PD1的ScFv-Fc抗体与上述靶细胞以及T细胞上抗原的结合能力，并采用Fortebio分子互作仪进行抗原抗体结合解离动力学验证。分别采用Knobs-into-holes(KIH)突变策略构建ScFv-KIH双特异性抗体结构，以及类DVD-Ig(Dual variable domain immunoglobulin)分子结构，构建ScFv串联型(ScFv)2-Fc结构的双特异性抗体，并分别对表达的2种双特异性抗体进行了功能验证。结果 抗CD96和PD1的ScFv-Fc抗体可特异性识别靶细胞和T细胞上的靶抗原，构建生产的2种结构的双特异性抗体均能正常表达，且能同时靶向CD96和PD1 2种抗原。结论 ScFv-KIH和(ScFv)2-Fc型的双特异性抗体表达成功，并可同时识别CD96和PD1抗原。

• 单位
  医药学院; 重庆市肿瘤研究所; 浙江理工大学