双靶点抗乳腺癌Del1-9-G129R-T3融合蛋白真核表达载体的构建及体外抗肿瘤活性实验

作者：顾丽; 苏燕; 闫艳

来源：中国新药杂志, 2019, 28(24): 3016-3023.

• 融合蛋白Del1-9-G129R-T3
• 真核表达
• 抗肿瘤活性
• 人乳腺癌细胞
• 人脐静脉内皮细胞

目的:构建融合蛋白Del1-9-G129R-T3真核表达载体,研究融合蛋白相对于人催乳素受体拮抗剂Del1-9-G129R和肿瘤抑素(tumstatin)活性多肽T3对乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉内皮细胞HUVEC抑制增殖与促进凋亡作用的差异。方法:以质粒pET22b(+) Del1-9-G129R-T3为模板,PCR扩增目的片段Del1-9-G129R-T3和Del1-9-G129R,链接至pCDNA3. 1(-)/Myc-His A真核表达载体。T3片段由上海生工合成并以直接退火的方式链接载体。qRT-PCR和Western Blot分别检测目的基因在mRNA和蛋白水平的相对表达。CCK8细胞增殖实验和流式细胞术分别测定MDA-MB-231和HUVEC细胞的增殖与凋亡。结果:重组质粒转染MDA-MB-231和HUVEC细胞后,qRT-PCR和Western Blot检测目的基因在细胞内有较高的相对表达。CCK8和流式分析显示,融合蛋白Del1-9-G129R-T3对MDA-MB-231细胞抑制增殖和促进凋亡作用比对照Del1-9-G129R和T3肽效果更显著,而且对MDA-MB-231细胞作用明显高于HUVEC细胞。结论:Del1-9-G129R-T3相比Del1-9-G129R和T3,对乳腺癌细胞的抑制增殖和促进凋亡效果更佳。MDA-MB-231细胞相比HUVEC细胞,融合蛋白作用更明显。

• 单位
  内蒙古科技大学包头医学院