靶向Notch1基因siRNA真核表达载体的构建与鉴定

作者：艾星; 居正华; 吴准; 史涛平; 王保军; 徐华; 刘双林; 吴正启; 胡建庭; 周辉霞; 张旭

来源：临床泌尿外科杂志, 2008, (05): 391-394.

• Notch1
• 小分子干扰RNA
• 真核表达载体

目的:构建并鉴定靶向Notch1基因的siRNA真核表达载体。方法:根据Notch1基因cDNA序列,设计靶向目的基因的3个siRNA靶序列,将其插入U6启动子下游,克隆到真核表达载体pGsensil中,并进行酶切鉴定和DNA测序鉴定。采用脂质体介导法将构建好的3个siRNA表达载体分别转染T24人膀胱癌细胞中,荧光下观测转染效率。RT-PCR检测Notch1基因mRNA在转染前后的表达。结果:转染48h后3个siRNA表达载体均不同程度的抑制了Notch1 mRNA的表达。酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论:成功构建的靶向Notch1的siRNA真核表达载体,具有抑制Notch1基因mRNA表达的功能,可能为膀胱癌基因治疗研究提供一个新的方向。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院