体外转录制备的siRNAs对SARS-CoV复制的抑制作用

作者：石孝民; 周高标; 毛丽伟; 姜曼; 黎万玲; 何仰东; 吴玉章; 倪兵

来源：免疫学杂志, 2005, (06): 438-441.

• 严重急性呼吸器官综合征
• RNA干扰
• RNA依赖性RNA聚合酶
• 小干扰RNA

目的体外研究针对SARSCoVRNA依赖性RNA聚合酶(RNAdependentRNApolymerase,RdRp)的小干扰RNA(SmallinterferenceRNA,siRNA)对SARSCoV感染的抑制效应。方法利用Ambion公司在线设计工具,设计出4条针对RdRp基因的siRNAs,并在体外利用试剂盒进行转录合成。在SARSCoV感染前1d,将这4条体外转录的siRNAs用Lipofectamine2000试剂转染入VeroE6细胞中。感染后,每天观察感染细胞的细胞病变效应(Cytopathiceffect,CPE)。第5天,用空斑形成实验(Plaqueformationunit,PFU)检测感染细胞培养上清液中SARSCoV滴度。结果CPE结果显示,在感染后的前4d,各siRNAs均能有效地保护细胞免受感染;在第5天,4条siRNAs中有3条仍能有效保护细胞不被感染。PFU实验结果显示,在第5天,所有siRNAs转染的细胞培养上清液中,SARSCoV的滴度均显著低于阳性对照(P<0.001)。结论实验结果表明针对SARSCoV的RdRp基因的siRNAs能有效而特异地抑制该病毒在哺乳动物细胞中的复制和繁殖,提示如果应用合适的给药途径,RNAi策略可以用于体内抑制SARSCoV的感染。

• 单位
  第三军医大学; 中国人民解放军空军总医院