近红外双荧光系统在磷酸酯酶筛选中的应用

作者：杨昕霆; 阎海霞; 沈珝琲; 张业

来源：医学研究杂志, 2014, 43(05): 52-54.

• 奥德赛近红外双荧光扫描系统
• KDM3A
• 磷酸酯酶

目的应用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统筛选去甲基化酶KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶。方法使用磷酸酯酶干扰质粒转染HEK293T细胞,使用磷酸化的KDM3A抗体对细胞进行杂交,近红外荧光染料DRAQ5标记细胞核,利用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统对细胞进行荧光扫描,荧光强度的比值可代表细胞内相对KDM3A磷酸化水平,进而筛选出相关的磷酸酯酶。结果磷酸酯酶广谱抑制剂冈崎酸OA处理转染后的细胞,近红外双荧光扫描系统可以检测到KDM3A的磷酸化,初步筛选出4个可能参与KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶亚基。结论近红外双荧光系统可以应用于磷酸酯酶的初步筛选。

• 单位
  北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所; 医学分子生物学国家重点实验室