猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建

作者：魏国燕; 李坤; 卢曾军; 刘在新; 孙普; 白兴文; 李冬; 陈应理; 包慧芳; 李平花; 付元芳; 张婧; 马雪青; 曹轶梅

来源：中国兽医学报, 2018, 38(01): 177-182.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.01.28

• 猪CLEC8A基因
• 骆驼单域抗体
• 酵母展示文库
• 流式细胞术

为构建猪C型凝集素受体8A(C-type lectin domain family 8,member A,CLEC8A)的单域抗体酵母展示文库,本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析,鉴定出该受体胞外区基因序列,并插入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼,间接ELISA监测抗体滴度,于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA,反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼VHH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞(EBY100),经细胞内同源重组,成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明,文库大小约为1.6×107,文库重组率达90%,文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体,为后续文库筛选奠定基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所