摘要
通过自杀质粒介导的同源重组方法将绿色荧光报告基因(GFP)标记至含mcr-1基因多黏菌素耐药质粒pSH13G841上, 形成可发出绿色荧光的质粒pSH13G841-GFP;通过改造大肠J53菌株, 构建带有红色荧光报告基因(RFP)标记的大肠杆菌J53-RFP。随后利用pSH13G841-GFP自发接合的能力, 将pSH13G841-GFP质粒转化入J53-RFP菌体中, 构建出双荧光标记的耐药质粒供体菌模型, 能够稳定且自发地发出红色荧光和绿色荧光。构建的双荧光标记系统可用于耐药质粒水平转移的可视化追踪, 为动态监测耐药基因mcr-1在生物体内的接合转移规律提供了可能。
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