三种无缝克隆试剂盒连接效率的比较

作者：邢体坤; 王斌; 郭冰峰; 宋路萍; 杨振苹; 荆新蕊; 郝一楠; 张静静^*

来源：中国医药科学, 2020, 10(17): 74-77.

• 无缝克隆
• 阳性克隆率
• 限制性内切酶
• PCR扩增

目的比较生工生物工程(上海)股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒连接效率,为文库构建选择试剂盒提供参考。方法本研究采用Nco I和Xho I酶切pET26b获得线性化载体,PCR扩增制备线性化片段。无缝隙克隆反应体系转化感受态大肠杆菌,菌落PCR鉴定三种重组试剂盒连接阳性率。结果生工生物工程(上海)股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒分别长出107、86和16个克隆,阳性率分别为90.91%、72.73%和43.75%。结论从试剂盒性价比,转化总克隆数量和阳性克隆率等方面考虑,生工生物工程(上海)股份有限公司的无缝克隆试剂盒为文库构建的最佳选择。

• 单位
  华兰基因工程有限公司; 华兰生物工程股份有限公司