小鼠膀胱平滑肌原代细胞体外培养及纤维连接蛋白1的小干扰RNA转染对周期、凋亡的影响

作者：李鹏; 顾朝辉; 贾占奎; 杨锦建^*

来源：中华实验外科杂志, 2020, 37(08).

• 膀胱平滑肌细胞
• 原代培养
• 纤维连接蛋白1
• 细胞周期
• 脱噬作用

目的建立一种体外连续传代培养小鼠膀胱平滑肌细胞(BSMCs)的方法并探讨纤维连接蛋白1(FN1)沉默对小鼠BSMCs周期分布和凋亡的影响。方法采取多酶联合消化法进行原代培养, 分离获取小鼠原代BSMCs, 通过形态学观察和免疫荧光法对细胞进行鉴定;使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法对其增殖特性进行检测。使用针对FN1的小干扰RNA(FN1-siRNA)转染BSMCs, 将体外培养的BSMCs分为空白组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照NC-siRNA)和干扰组(转染FN1-siRNA), 流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率。3组间以上指标的比较采用单因素方差分析, 两两比较采用SNK-q检验。结果从小鼠中获得的BSMCs纯度可达97%, 细胞呈典型的"峰-谷"样结构。免疫荧光鉴定可见胞质内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性表达。FN1-siRNA转染后[G0/G1(68.20±3.82)%、S(17.78±1.48)%、G2/M(14.04±2.04)%]与转染前[G0/G1(49.59±2.38)%、S(28.75±1.94)%、G2/M (21.71±1.93)%]比较, 增殖水平降低;与转染前[(3.12±0.65)%]比较, 转染后[(17.36±2.62)%]凋亡率升高(F=89.346, P<0.05)。结论体外培养获得的小鼠BSMCs具有较好增殖能力。靶向沉默FN1的表达可诱导BSMCs周期阻滞和凋亡。

• 单位
  郑州大学第一附属医院