GATA4基因慢病毒载体构建与鉴定

作者：张帆; 厍广岩; 钟浩; 马伟; 宗渊; 武建英^*

来源：山东医药, 2020, 60(34): 44-56.

• 先天性心脏病
• 锌指转录因子4
• RNA干扰
• 基因沉默

目的构建锌指转录因子4(GATA4)基因慢病毒载体并鉴定。方法设计2条GATA4基因siRNA干扰序列,与双酶切后的pMGic7.1载体连接。将构建的GATA4基因慢病毒载体转染293T细胞,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,采用Western bloting法检测GATA4蛋白表达,采用RT-qPCR法检测GATA4 mRNA表达。结果 p MGic7.1载体可与其中1条siRNA干扰序列正确连接,其基因序列如下:CGAAACACCGGGGACATAATCACTGCGTAATCCTCGAGGATTACGCAGTGATTATGTCCTTTTTTGAATTCGGA(黑体部分为siRNA干扰序列),符合实验要求。空白对照组未添加目的基因,在45 kDa处无蛋白条带;实验组GATA4蛋白相对表达量为0.739±0.056,阴性对照组为0.997±0.001,两组比较P <0.05。实验组GATA4 mRNA相对表达量为0.362±0.024,阴性对照组为0.998±0.001,空白对照组为0.812±0.001,实验组GATA4 mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论成功构建了GATA4基因的慢病毒载体,GATA4基因在体外可被有效抑制。

• 单位
  青海大学; 青海大学附属医院