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摘要
本研究针对不同亚型人类乳头状瘤病毒（HPV）-DNA L1基因区域的序列差异设计相应的特异性扩增引物及探针，在单管多重聚合酶链式反应（PCR）扩增后偶联核酸侵入反应及纳米金探针杂交显色，结合集约化的分管检测方案判读分型检测结果，同时考察方法的检测灵敏度和特异性，并应用于临床宫颈拭子样本的分型检测以评价方法的临床适用性，建立了一种通过6个检测管实现15种HPV亚型可视化分型检测的方法。本方法检测灵敏度高，3种亚型（HPV56、HPV66和HPV45）检测灵敏度可达1 copy/reaction, 7种亚型（HPV73、HPV59、HPV18、HPV39、HPV6、HPV58和HPV31）检测灵敏度为10 copy/reaction, 5种亚型（HPV68、HPV35、HPV51、HPV16和HPV11）的检测灵敏度为100 copy/reaction；检测特异性好，不同亚型分型检测时无交叉反应，不相互干扰。27例实际样本的分型结果与临床采用的HPV分型检测试剂盒（PCR-反向斑点杂交法）结果一致（27/27, 100%）。所建立的HPV多重可视化分型检测方法灵敏度高、特异性好，通过分型检测管的显色结果指示具体亚型，肉眼即可判读结果，无需特殊仪器，具有应用于临床HPV分型检测的潜力，可在宫颈癌及癌前病变的早期筛查诊断中提供指导，尤其适用于资源有限地区。
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