RNA干扰趋化因子受体4基因表达对神经母细胞瘤体外侵袭能力的影响

作者：陈鑫; 董蒨; 鹿洪亭; 郝希伟; 邢士超

来源：中华小儿外科杂志, 2011, 32(04): 285-289.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2011.04.013

• 受体,趋化因子
• RNA干扰
• 神经母细胞瘤

目的构建趋化因子受体4（CXCR4）小分子干扰RNA（siRNA）表达载体,研究其对体外神经母细胞瘤侵袭能力的影响。方法选择CXCR4高表达的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的3条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pSilencerTMneo中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染SH-SY5Y细胞,用半定量RT-PCR分析CXCR4基因mRNA的变化,用免疫组织化学和Western blot分析CXCR4蛋白表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,转染后半定量RT PCR检测神经母细胞瘤细胞CXCR4 mRNA丰度分别为siR1转染组0.32±0.09、siR2转染组0.35±0.13和siR3转染组0.33±0.11,相对于对照组0.58±0.13表达下降（P<0.05）;转染后免疫组化检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siR1转染组75.98±4.81、siR2转染组75.52±3.95和siR3转染组76.35±6.51,相对于对照组92.196±3.89表达下降（P<0.01）;转染后Western blot检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siR1转染组0.1103±0.0023、siR2转染组0.1203±0.0015和siR3转染组0.1308±0.0018,相对于对照组0.4832±0.0012表达下降（P<0.01）;且转染后神经母细胞瘤细胞侵袭能力较对照组53.11±3.72降低（P<0.05）,siR1转染组为25.48±2.81、siR2转染组为30.89±2.77、siR3转染组为18.83±1.79。结论 CXCR4-siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制神经母细胞瘤细胞的体外侵袭能力,有望为神经母细胞瘤的基因治疗开辟新途径。

• 单位
  青岛大学医学院附属医院; 中心实验室