小干扰RNA调控多药耐药相关蛋白1基因对SMMC7721肝癌细胞株多药耐药性的影响

作者：汪洋; 褚忠华; 刘建平; 苏正; 张华耀

来源：中华实验外科杂志, 2013, 30(9): 1889-1892.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2013.09.038

• 癌
• 肝细胞
• 多药耐药基因
• 多药耐药相关蛋白1
• RNA干扰

目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)基因片段导入SMMC7721耐药细胞,干扰多药耐药相关蛋白1 (MRPl)基因后,观察其对细胞化疗敏感性的影响.方法 使用浓度递增法制作耐阿霉素(ADM)细胞株,将ADM浓度在2 mg/L时培养出的细胞,命名为SMMC7721/ADM细胞,转染25、50、75 nmol/L siRNA沉默此耐药株MRP1基因,于转染后24、48、72 h使用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞MRPl mRNA表达水平.于12、24、36、48、60 h用噻唑蓝(MTT)法检测细胞对化疗药物的敏感性,加入反应试剂进行流式细胞仪检测细胞凋亡水平,使用Western blot分别检测细胞中MRP1蛋白表达含量.细胞注入裸鼠右侧肩胛区,14 d后测量肿瘤的长径和宽径.结果 SMMC7721/ADM细胞对阿霉素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、奥沙利铂(OHP)的耐药系数分别为25.43、68.32、39.17、18.31.RT-qPCR检测沉默效率,可见MRP1的表达明显降低(P＜0.05).MRP1基因沉默后,Western blot技术可见MRP1蛋白明显降低.流式细胞仪可见细胞凋亡明显多于沉默前(P＜0.05).多药耐药性的检测可见细胞对上述药物耐药系数降低为5.73、15.86、2.49、1.84.动物实验监测肿瘤生长,可见肿瘤生长率明显降低.结论 SMMC7721耐药细胞株在使用siRNA沉默MRP1基因后,对化疗药的耐药性有明显下降.MRP1基因与SMMC7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默MRP1基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院