科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 探讨Wilms肿瘤1相关蛋白（WTAP）对宫颈癌细胞增殖的影响及其机制。方法结合Onco Lnc数据库和Cancer RNA-Seq Nexus(CRN)数据库分析WTAP基因与宫颈癌患者预后的相关性；通过Western blot分析人正常宫颈上皮细胞（HUCEC）、宫颈癌Si Ha和He La细胞之间WTAP蛋白表达的差异；利用小干扰RNA(si RNA)和质粒转染分别调控He La细胞中WTAP的表达。He La细胞分为对照si RNA组（NC siRNA）、WTAP-si RNA组（WTAP siRNA）、对照质粒组（Empty vector）、WTAP过表达质粒组（WTAP OE vector）。通过Western blot验证转染效果，CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖，Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT）活性和G蛋白信号调节物5(RGS5)的表达，m6A-IP-q PCR检测RGS5的N6-甲基腺嘌呤（m6A）修饰水平。结果 WTAP基因高表达组宫颈癌患者的总生存期显著低于WTAP基因低表达组患者[Log-rank检验P=0.0412(Onco Lnc)和0.0078(CRN)]。与HUCEC相比，宫颈癌细胞Si Ha和He La细胞WTAP蛋白表达显著升高，He La细胞升高更加显著（P <0.05）。与对照si RNA组相比，WTAP-si RNA组He La细胞增殖能力显著升高（P <0.05）,AKT磷酸化水平显著降低、RGS5表达显著增多（P <0.05）,RGS5 m6A水平显著降低（P <0.05）；与对照质粒组相比，WTAP过表达质粒组He La细胞增殖能力显著降低（P <0.05）,AKT磷酸化水平显著升高、RGS5表达显著减少（P <0.05）,RGS5 m6A水平显著升高（P <0.05）。结论 WTAP促进宫颈癌He La细胞增殖，其机制与调节RGS5的m6A修饰，从而影响AKT信号通路有关。
- 单位
