摘要
目的:采用高速逆流色谱法(HSCCC)对楤木大孔树脂纯化所得总皂苷中的楤木皂苷A进行分离纯化并做体外抗血小板研究。方法:采用75%乙醇渗滤提取楤木原药材,渗滤液经过大孔树脂纯化,所得总皂苷粉末作为高速逆流色谱分离的样品。采用TBE-300B型高速逆流色谱仪,以氯仿∶甲醇∶正丁醇∶水(4∶4∶1∶3.5)为溶剂体系进行分离纯化,采用两种逆流色谱操作模式(0~130 min为正接正转,体系下相流动;130~180 min为正接反转,体系上相流动,流动相流速为5.0 mL·min-1,仪器转速为850 r·min-1,温度为25℃)进行分离。采用二磷酸腺苷(adenosine diphosphate, ADP)诱导小鼠体外血小板聚集,分别采用不同浓度HSCCC分离后的四号馏分处理,检测空白对照管与不同浓度的4号馏分给药管富血小板血浆在5 min内的最大聚集率,计算血小板聚集的抑制率。结果:楤木大孔树脂提取物经过HSCCC一步纯化,得到的楤木皂苷A纯度为95.81%;分离所得楤木皂苷A呈浓度依赖的抑制ADP诱导的血小板聚集,最大抑制率达80%。结论:利用大孔树脂富集总皂苷,HSCCC分离纯化总皂苷中的楤木皂苷A,为楤木皂苷A的分离纯化提供了一种新的简便、高效的途径。抗血小板活性研究表明HSCCC法分离得到的楤木皂苷A具有初步的抗血小板凝聚作用。
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