花烟草NaD1基因的原核表达及纯化

作者：罗显麟; 赵德刚; 赵懿琛^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(11): 3502-3508.

DOI：10.13271/j.mpb.018.003502

• NaD1
• 防御素
• 原核表达
• 亲和纯化

花烟草的花中特异地存在一种植物防御素Nicotiala alata defensin 1 (NaD1),对多种致病性真菌具有防御活性,在天然免疫系统中起着重要作用。该蛋白还对哺乳动物肿瘤细胞具有杀伤作用。本研究构建了原核表达载体p ET28a-NaD1,将其转化到Rosetta菌株中进行诱导表达并优化了诱导表达条件,发现在25℃下,0.5 mmol/L IPTG诱导表达过夜后,目的蛋白积累量达到最高,并主要以可溶性蛋白形式存在。利用Ni柱对NaD1重组蛋白进行亲和层析纯化,产物经Western Blot鉴定发现在16.8 kD处有特异性条带,与预期的NaD1重组蛋白大小一致。本研究结果为进一步研究NaD1蛋白的作用机制提供实验依据。

• 单位
  农业部; 贵州大学; 贵州省农业科学院