兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价

作者：原冬伟; 刘家森; 郭东春; 司昌德; 姜骞; 林欢; 穆亚芳; 刘行波; 曲连东

来源：中国兽医学报, 2011, (11): 1582-1586.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.11.004

• 核酸疫苗
• 真核表达
• VP60
• ELISA
• T淋巴细胞
• PCR检测 DNA vaccine
• eukaryotic expression
• T lymphocyte
• PCR test

利用pMD18-T-VP60质粒(包含RHDV-TP株VP60基因)PCR扩增并酶切回收VP60基因片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-VP60,对重组质粒进行酶切和PCR鉴定;将重组质粒转染RK13细胞,进行间接免疫荧光和Western-blot检测;将构建好的重组质粒作为核酸疫苗,腿部肌肉注射免疫小鼠,采用间接ELISA法检测抗体水平;采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞术(FACS)检测细胞免疫情况;采用PCR方法检测重组质粒在小鼠体内的生物安全性。结果显示,成功构建pcDNA-VP60真核表达质粒,并在RK13细胞中获得表达。重组质粒作为...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所