高糖微环境下miR-449对人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用和机制研究

作者：彭凤; 刘浩; 杨红胜; 屈波^*

来源：四川医学, 2023, 44(05): 477-483.

DOI：10.16252/j.cnki.issn1004-0501-2023.05.006

• 骨髓间充质干细胞
• 2型糖尿病
• 糖尿病骨质疏松
• 成骨分化

目的 探讨miR-449在高糖(HG)作用下对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的作用机制。方法 将hBMSCs接种于成骨培养基培养，诱导其成骨分化。实验组：成骨培养基中加入高糖25 mmol/L,模拟高糖微环境处理。对照组：细胞维持在5 mmol/L葡萄糖的正常培养基中。采用茜素红染色、碱性磷酸酶活性测定、双荧光素酶测定、实时定量PCR(qRT-PCR)检测等方法测定以下指标：(1)miR-449在HG诱导的hBMSCs成骨分化时的表达水平；(2)miR-449模拟物和抑制物对碱性磷酸酶(ALP)活性，成骨相关标志物表达的影响；(3)Sirt1和Fra-1的过表达对miR-449在HG处理的hBMSCs成骨分化标志物表达的影响。结果 (1)HG处理的实验组hBMSCs成骨分化低于对照组细胞(P<0.05),miR-449表达水平较对照组降低(P<0.05)。(2)在HG诱导的hBMSCs成骨分化过程中，miR-449模拟物可降低ALP活性(P<0.05),降低成骨标志物的mRNA表达(P<0.05);而miR-449抑制剂能提高成骨标志物的mRNA活性(P<0.05)。(3)miR-449直接靶向结合Sirt1,Sirt1过表达逆转了miR-449模拟物对Fra-1mRNA表达的抑制作用，而Fra-1的过表达减轻了这种抑制作用；过表达Fra-1可减轻miR-449模拟物对ALP活性及成骨标志物mRNA的抑制作用。结论 miR-449过表达通过Sirt1/Fra-1信号通路抑制HG处理的hBMSCs的成骨分化；通过调节miR-449可能为糖尿病骨质疏松症的干预提供一种新的治疗方法。

• 单位
  成都医学院第一附属医院