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摘要
目的:确定CHO-K1细胞能否够分泌外泌体,运用液相色谱-质谱联用技术鉴定无血清培养条件下CHO-K1细胞培养上清中的蛋白质和外泌体中蛋白质的成分。方法:将CHO-K1细胞驯化至无血清培养基中,采用exoRNeasy血清/血浆试剂盒提取培养基中的外泌体,透射电镜复染法鉴定其大小和形态,质谱法鉴定标志蛋白;提取培养上清和外泌体中的蛋白,运用nanoLC-ESI-MS-MS技术进行鉴定,对鉴定到的蛋白质进行基因本体论(GO)注释分析。结果:从培养上清样本中鉴定到1 243种蛋白质,分子质量范围在7～559 kDa,等电点(PI)在3～11;透射电镜下可见外泌体的双层膜小囊泡结构;从外泌体样本中鉴定到1 259种蛋白质,分子质量范围在5～4 007 kDa,等电点在3～12,其中鉴定到外泌体标志蛋白有膜连蛋白、肿瘤易感蛋白、Rab蛋白、热休克蛋白-90和热休克蛋白-60;GO注释结果显示上清蛋白和外泌体蛋白主要都来源于细胞器和细胞的膜结构。结论:形态学和标志蛋白的鉴定结果确认CHO-K1细胞的培养上清中存在外泌体,并初步构建了无血清条件下CHO-K1细胞的培养上清蛋白质和外泌体蛋白质的质谱数据集。
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单位南昌大学; 资源环境与化工学院
