结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA的克隆表达及免疫组织化学分析

作者：李自慧; 杜博平; 贾红彦; 张海青; 周丽娟; 邢爱英; 曹廷明; 郑晓静; 陈曦; 张宗德

来源：中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2013, (01): 5-10.

• 结核分枝杆菌
• 抗体
• 免疫组织化学 Mycobacterium tuberculosis
• Antibody
• Immunohistochemistry

目的克隆、表达结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA,并制备多克隆抗体进行免疫组织化学分析,研究其免疫原性、免疫反应性及体内表达情况。方法采用高保真PCR法扩增结核分枝杆菌mshA基因,将基因克隆入表达载体pET30a(+),证实序列正确后转化入大肠埃希菌BL21(DE3),并采用IPTG诱导表达。将重组蛋白大量表达纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行亲和纯化,用重组MSHA蛋白与其多克隆抗体进行Westernblot鉴定。制备感染结核分枝杆菌的小鼠肺组织病理切片,尝试用免疫组织化学和抗酸染色法检测感染小鼠肺组织中结核分枝杆菌MSHA蛋白的表达。结果成功扩增片段大小为1443bp的msh...

• 单位
  首都医科大学附属北京胸科医院; 北京市结核病胸部肿瘤研究所