棕榈酸联合TGF-β1诱导脂肪性肝纤维化细胞模型

作者：梁涵子; 李雨涵; 李家瑞; 李建宁; 宋辉; 杨怡^*

来源：宁夏医科大学学报, 2021, 43(06): 549-555.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2021.06.001

• 脂肪性肝纤维化模型
• LX-2细胞
• HepG2细胞
• TGF-β1
• 棕榈酸

目的通过使用不同浓度的棕榈酸(PA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分别诱导人肝星状细胞(LX-2)与人肝癌细胞(HepG2)探讨制备脂肪性肝纤维化细胞模型的方法。方法选用人LX-2细胞与人HepG2细胞,分别给予100、200、400μmol·L-1PA处理及2、5、10 ng·mL-1TGF-β1处理,两组均处理24 h后利用MTT细胞毒性实验检测细胞存活率,通过油红O染色检测细胞脂肪变性,采用qRT-PCR与Western blot实验检测细胞α-平滑肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的mRNA及蛋白表达水平,了解细胞纤维化情况。结果 MTT结果显示,不同实验组与对照组比较,PA分别诱导HepG2细胞与LX-2细胞24 h后,两组细胞存活率在100、200、400μmol·L-1PA的诱导下出现不同程度降低(P均<0.01);TGF-β1分别诱导两组细胞24 h后,细胞存活率在5、10 ng·mL-1TGF-β1诱导下出现不同程度降低(P均<0.05)。油红O染色结果显示,与对照组相比,不同浓度PA诱导24 h后,HepG2、LX-2细胞均随PA浓度的增大,脂滴形成增多,具有明显的浓度依赖性;不同浓度TGF-β1诱导24 h后,HepG2细胞内未见明显脂滴,2、5 ng·mL-1TGF-β1诱导后LX-2细胞内可见少量脂滴,10 ng·mL-1TGF-β1诱导后可见LX-2细胞内脂滴明显增多。q RT-PCR结果显示,200、400μmol·L-1PA诱导HepG2细胞内、400μmol·L-1PA诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均<0.01);10 ng·mL-1TGF-β1诱导HepG2组细胞内CollagenⅠmRNA相对表达水平上调,5、10 ng·mL-1TGF-β1诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均<0.05)。Western blot结果显示,200、400μmol·L-1PA及5、10 ng·mL-1TGF-β1诱导后两组细胞内α-SMA及CollagenⅠ的蛋白相对表达水平均升高(P均<0.05)。结论 200μmol·L-1PA诱导HepG2细胞24 h、10 ng·mL-1TGF-β1诱导LX-2细胞与HepG2细胞24 h是成功构建脂肪性肝纤维化细胞模型的适宜条件。

• 单位
  基础医学院; 宁夏医科大学