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摘要
目的 观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响，并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法 以体外培养法培养成纤维细胞，并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）法检测经过盐酸青藤碱处理后，成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变，用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响，蛋白质印迹法（Western blot）检测相关蛋白质的表达。结果 盐酸青藤碱能降低成纤维细胞存活率，且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显（P<0.05）。在相关基因的mRNA表达层面，与对照组比较，盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调（P<0.05），凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降（P<0.05），而PI3K/mTOR/AKT3信号通路分子的mRNA表达量均下降（P<0.05）。在蛋白质表达层面，与对照组相比较，中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调（P<0.05），凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调，并且与给药剂量成正相关，而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节成纤维细胞的存活表现为显著的抑制作用，作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达，并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达，抑制Bcl-2的表达，抑制其下游PI3K/AKT3/mTOR信号通路的基因表达有关。结论 盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡，或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直提供新的方法。
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