科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-181a、miR-23a和miR-26b对乳腺癌孕激素受体(PR)表达的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测40例乳腺癌患者乳腺癌组织和癌旁组织中miR-181a、miR-23a和miR-26b表达,采用免疫组织化学染色法检测乳腺癌组织和癌旁组织中PR表达。通过定点突变改变孕酮受体(PGR)基因3+端非编码区(3+-UTR)的miR-181a、miR-23a和miR-26b的结合位点的碱基,将突变后的基因连接至psiCHECK2载体,同时构建miR-vec-181a-5p、miR-vec-23a-3p和miR-vec-26b-5p反转录病毒载体,将其转染至MCF-7乳腺癌细胞中。检测转染psiCHECK2载体细胞荧光素酶相对表达水平。采用FQ-PCR法检测转染miR-vec-181a-5p、miR-vec-23a-3p和miR-vec-26b-5p反转录病毒载体后各细胞PR mRNA相对表达水平。结果所有患者癌旁组织miR-181a、miR-23a和miR-26b相对表达水平分别比较差异无统计学意义(t=0.499,0.717、0.472=0.621、0.478、0.640),乳腺癌组织中miR-181a、miR-23a和miR-26b相对表达水平分别显著低于相应癌旁组织中的表达水平(t=7.632、6.984、4.382,P值均为0.000);PR阳性患者乳腺癌组织中的miR-181a、miR-23a和miR-26b相对表达水平均显著低于PR阴性患者(t=8.441、7.359、4.563,P值均为0.000)。野生型miR-181a、miR-23a和miR-26b共转染48 h时的荧光素酶相对活性分别为0.52±0.03、0.78±0.07和0.78±0.04,突变型miR-181a、miR-23a和miR-26b共转染48 h时的荧光素酶相对活性分别为0.95±0.05、0.93±0.06和1.02±0.05,两者差异有统计学意义(t=25.546、5.636、12.984,P值均为0.000)。miR-vec-181a-5p、miR-vec-23a-3p和miR-vec-26b-5p反转录病毒载体转染MCF-7细胞6 h后PR mRNA水平均降低,但是miR-181a过表达对PR mRNA相对表达水平的影响可持续至转染后18 h,miR-26b和miR-23a转染组则在12 h后恢复至基础水平。在转染24 h后,所有转染组细胞PR mRNA相对表达水平均恢复至基础水平。结论miR-181a、miR-23a和miR-26b可负向调节雌激素受体(ER)阳性乳腺癌患者PR表达。
- 单位
