诱导pIRES-Egrl-EGFP-Omi/HtrA2的表达对人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1凋亡的影响

作者：余天; 闫淑; 张帆; 易成腊; 孙旭芳

来源：中华实验外科杂志, 2013, (05): 1038-1041.

• 脉络膜黑色素瘤
• 早期生长反应基因1
• Omi/HtrA2
• 脱噬作用

目的诱导pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2质粒在人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1的表达,观察其对OCM-1细胞凋亡的影响。方法设计合成pIRES-Egr1-EGFP及pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2质粒,用Lipofectamine~(TM)2000脂质体法分别转染入OCM-1细胞,50μmol/L双氧水干预转染细胞后,荧光显微镜观察两组细胞转染表达效率。Western blot检测质粒表达后Omi/HtrA2以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的蛋白,流式细胞仪和噻唑蓝(MTT)法检测细胞凋亡。结果构建的两组质粒分别转染入OCM-1细胞,转染pIRES-Egr1-EGFP组和pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2组细胞在双氧水干预后表达绿色荧光细胞数均较干预前增加(P<0.05),分别为78.9±7.8和80.3±3.2。pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2组细胞在双氧水干预后,Omi/HtrA2和XIAP蛋白的表达分别较诱导前增加53.5%和降低31.9%,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率显著增加,细胞凋亡数增加到[(8.19±2.13)%,P<0.01]。结论双氧水能有效的启动pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2质粒并诱导其下游的基因表达,引起细胞的凋亡增加,其机制与Omi/HtrA2以及XIAP蛋白表达变化相关。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院