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摘要
目的研究麝香保心丸促血管新生的机制。方法采用随机、双盲、安慰剂对照法,在293 A细胞中研究麝香保心丸是否影响YAP磷酸化作用。对试验药物及安慰剂进行随机混合编号,对实验人员及结果统计人员设盲,按实验结果揭盲组别,统计组间差异,再揭盲药物信息。然后,进一步在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中研究麝香保心丸对Hippo-YAP信号通路的影响,Western Blot检测Hippo通路中LATS1、YAP磷酸化变化,免疫荧光检测YAP细胞质和细胞核分布,RT-PCR检测其下游靶基因CTGF、CYR61及促血管新生细胞因子VEGF、bFGF表达。慢病毒敲低HUVEC YAP表达后,观察麝香保心丸对VEGF、bFGF表达的影响。结果与安慰剂比较,麝香保心丸可明显抑制293 A细胞在无血清条件下YAP磷酸化。在HUVEC细胞中,麝香保心丸亦可显著降低无血清条件下YAP磷酸化水平,可能与抑制LATS1活性有关,表现为LATS1 T1079和T909位点磷酸化降低,使YAP S127位点磷酸化减少而呈现激活状态。激活的YAP蛋白进入细胞核,促进其下游靶基因CTGF、CYR61及促血管新生细胞因子VEGF、bFGF表达;敲低HUVEC YAP表达后,麝香保心丸上调促血管新生因子的表达作用被明显抑制。结论麝香保心丸可能通过影响内皮细胞Hippo-YAP信号通路来促进血管新生。
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