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摘要
目的研究miRNA-26a在大鼠脑梗死中的作用以及miRNA-26a对脑梗死大鼠血管生成的影响。方法将16只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组和脑梗死模型组,采用MCAO法建立大鼠脑梗死模型,TTC法检测大鼠脑梗死体积,Garcia法评估大鼠神经功能。对体外培养和转染的大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)分为:正常组、miR-26a mimic组、miR-26a inhibitor组、mimic+VEGF inhibitor组和体外氧葡萄糖剥夺(OGD)组。正常组为正常大鼠脑微血管内皮细胞; miR-26a mimic组BMEC细胞转染miRNA-26a模拟物; miR-26a inhibitor组BMEC细胞转染miRNA-26a抑制剂; mimic+VEGF inhibitor组BMEC细胞转染miRNA-26a模拟物并添加VEGF抑制剂Sorafenib Tosylate; OGD组BMEC细胞建立体外氧葡萄糖剥夺模型。Trizol法提取细胞中的总RNA,RT-PCR法检测miRNA-26a的表达,MTT法检测细胞增殖和管壁形成情况,蛋白质免疫印迹分析检测VEGF、FGF和Ang蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织中miR-26a的表达显著上调(P <0.01)。体外的细胞培养中,与正常组相比,OGD组miR-26a的表达显著上调(P <0.01)。与正常组比较,miR-26a mimic组BMEC细胞凋亡率显著降低(P <0.01),小管的形成和长度以及细胞增殖率均显著增加(均P <0.01);与miR-26a mimic组相比,miR-26a inhibitor组中细胞凋亡率显著升高(P <0.01),小管的形成和长度以及细胞增殖率均显著降低(均P <0.01)。与正常组相比,miR-26a mimic组VEGF、FGF和Ang蛋白的表达水平均显著上调(P <0.01);与miR-26a mimic组相比,miR-26a inhibitor组VEGF、FGF和Ang蛋白的表达水平显著下调(P <0.01)。与miR-26a mimic组相比,mimic+VEGF inhibitor组小管的形成受到显著抑制(P <0.01),细胞的相对数目显著减少(P <0.01)。结论 miRNA-26a通过调节VEGF的表达影响脑梗死大鼠血管内皮功能及血管的重建和细胞的增殖,其有望成为脑梗死治疗的生物靶标之一。
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