鳜弹状病毒与传染性脾肾坏死病毒双重PCR检测方法的建立

作者：梁红茹; 范芷仪; 蔡秀珠; 付小哲; 林强; 刘礼辉; 黄志斌; 牛银杰; 林蠡; 李宁求

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2020, 48(03): 39-46+53.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2020.03.006

• 鳜弹状病毒
• 传染性脾肾坏死病毒
• 双重PCR
• 病毒检测

【目的】建立鳜弹状病毒(SCRV)和传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的双重PCR检测方法。【方法】分别针对SCRV N基因和ISKNV MCP基因的保守区域设计特异性引物,通过优化退火温度和引物用量(μL)比,建立SCRV和ISKNV的双重PCR检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行检验。应用建立的双重PCR方法对20份临床样品进行单一和双重PCR检测,比较单一和双重PCR的检测结果。【结果】成功建立了SCRV和ISKNV双重PCR方法,该法特异性较强,对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)、罗非鱼湖病毒(TiLV)等鱼类常见病毒无扩增;敏感性较好,对2种病毒DNA的检测下限均为0.01 ng/μL。20份临床样品的双重PCR样品检测结果显示,3份为SCRV阳性,11份为ISKNV阳性,2份为SCRV和ISKNV混合感染,结果与单一PCR检测结果一致。【结论】建立的SCRV和ISKNV双重PCR检测方法特异性较强,敏感性较好,可用于鳜鱼SCRV与ISKNV的快速鉴别诊断和分子流行病学调查。

• 单位
  仲恺农业工程学院; 动物科技学院; 中国水产科学研究院珠江水产研究所