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摘要
目的探讨黄芪菟箭合剂对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖活性的影响及其可能的机制。方法将雄性SD大鼠随机分为2组,分别以黄芪菟箭合剂及等体积蒸馏水灌胃,以制备含药血清和正常大鼠血清。将大鼠肾小球系膜(HBZY-1)细胞随机分为4组:5 mmol/L葡萄糖+正常血清组(con组),25 mmol/L甘露醇+正常血清组(D-mannitol组),30 mmol/L葡萄糖+正常血清组(HG组),30 mmol/L葡萄糖+含药血清组(HG+HQTJM组)。分别干预24、48、72 h后,应用CCK8法检测各组HBZY-1细胞的增殖活性,Western blot法检测各组HBZY-1细胞内胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ,COLIV)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的蛋白表达变化,real time PCR法检测各组HBZY-1细胞内肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)的mRNA表达变化,Elisa法检测细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的蛋白含量。结果与con组比较,D-mannitol组HBZY-1细胞的增殖和细胞内各成分的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);HG组干预48h及72h时HBZY-1细胞增殖活性明显增加,细胞内COLIV和FN蛋白表达增加,细胞内炎症因子TNF-α、IL-1β和AKT基因表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),PTEN基因表达水平下降,但差异无统计学意义(P>0.05),细胞培养上清中TNF-α、IL-1β蛋白表达明显增加(P<0.05)。与HG组比较,HG+HQTJM组在干预72h后,可显著抑制HBZY-1细胞增殖(P<0.05),降低细胞内COLIV和FN蛋白的表达;细胞内TNF-αmRNA表达量在干预24h后显著降低(P<0.05),IL-1βmRNA表达量在干预48 h及72 h后均显著降低(P<0.05);在3个干预时间点,HBZY-1细胞内PTEN的基因表达均明显增加,AKT的基因表达明显降低,细胞培养上清中TNF-α及IL-1β蛋白含量明显增加(P<0.05)。结论黄芪菟箭合剂可明显降低高糖状态下HBZY-1细胞的增殖活性,降低HBZY-1细胞内COLIV、FN蛋白的表达,可能与PTEN的激活及PI3K/AKT通路介导的炎症反应受到抑制有关。
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