摘要
目的研究人胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的生物学特性。方法将PANC-1细胞进行培养,以CD44和CD24作为细胞表面标志。利用流式细胞仪,从该细胞株中分离出细胞亚群。将所得到的有CD44-CD24-,CD44+CD24+表面标志的PANC-1细胞和未分选的PANC-1细胞置于含有10ng/mL成纤维细胞生长因子、20ng/mL上皮生长因子和ITS(胰岛素、转铁蛋白和硒混合溶液)无血清DMEM/F12(1:1)培养基中,以MTT法检测不同亚群细胞体外增殖活性;通过裸鼠体内接种成瘤实验,鉴定各亚群细胞体内增殖能力;通过ABC法检测成瘤组织和PANC-1细胞株中CD44和CD24的表达。结果PANC-1细胞系中CD44+和CD24+的表达分别为5.1%~17.5%和21.8%~70.1%,CD44+CD24+的表达为0.9%~3.5%;与CD44-CD24-亚群比较,CD44+CD24+亚群生长缓慢,第7天才出现指数生长的趋势,增殖能力较低,倍增时间更长,而前者第5天已出现指数生长的趋势。裸鼠皮下植入5×103个CD44+CD24+亚群细胞,4周即可见明显的新生肿瘤块(2/8),而植入1×105个D44-CD24-亚群细胞,12周也难形成种植瘤。前者体外成瘤能力比后者至少强20~50倍(P<0.05或P<0.01);所形成的肿瘤和PANC-1细胞系无组织学差异。结论CD44和CD24可作为分选PANC-1中肿瘤干细胞的表面标志;分选出的CD44+CD24+亚群细胞具有肿瘤干细胞的初步特征。
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单位华中科技大学同济医学院附属协和医院