人前列腺特异性抗原启动子调控的CXCR4-siRNA逆转录病毒载体的构建及其对前列腺癌细胞的生物学效应

作者：杜岳峰; 邢毅飞; 曾甫清; 陆鹏; 刘先艮; 肖亚军

来源：中华肿瘤杂志, 2007, 29(07): 489-494.

DOI：10.3760/j.issn:0253-3766.2007.07.003

• RNA干扰
• 趋化因子受体4
• 人前列腺特异性抗原
• 前列腺肿瘤
• 肿瘤转移

目的构建人前列腺特异性抗原(hPSA)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,并探讨其对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞CXCR4基因表达的靶向抑制作用。方法PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGensil-1质粒,以hPSA启动子代替U6启动子,再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体pLXSN中,进行限制性酶切鉴定。转染。PA317包装细胞,收获病毒上清,分别转染前列腺癌细胞PC-3m、LNCaP和人乳腺癌细胞MCF7。采用RT-PCR、Western blot检测CXCR4基因表达。Transwell小室侵袭实验检测前列腺癌细胞体外侵袭能力的变化。结果通过限制性酶切鉴定该重组质粒,成功构建了CXCR4的RNA干扰质粒pLXSN/EGFP-hPSA-siCXCRd。与空载体组比较,CXCRd-siRNA对LNCaP细胞CXCR4 mRNA和蛋白表达抑制显著,48 h抑制率分别为(81.53±10.22)%和(90.52±9.31)%;对PC-3m、MCF-7细胞CXCRd mRNA和蛋白表达无抑制作用。Transwell侵袭实验结果显示,LNCaP细胞干扰组微膜下孔细胞数为(139.9±14.2)个,空载体组为(348.4±36.4)个,两组差异有统计学意义(P<0.05);PC-3m、MCF-7细胞干扰组微膜下孔细胞数与空载体组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论该逆转录病毒系统中,hPSA启动子调控的下游RNA干扰序列特异性地抑制激素依赖前列腺肿瘤细胞的CXCR4基因表达,具有明显的靶向性。hPSA启动子调控的靶向CXCRd基因的RNA干扰技术在激素依赖性前列腺癌的基因治疗中具有一定价值。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院