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摘要
目的 克隆温郁金茉莉酸氨基酸合酶关键基因JAR(JA-amino acid synthetase)的全长c DNA序列，并进行生物信息学和表达分析。方法 根据温郁金转录组数据设计特异性引物。以温郁金根茎的c DNA为模板，通过RT-PCR扩增获得JAR全长c DNA序列，利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的特征；利用ClustalW和MEGA 6.06软件构建温郁金JAR的系统进化树；构建原核表达载体PET-22B(+)-JAR，纯化重组蛋白JAR5，并进行鉴定。结果 扩增后的基因编码582个氨基酸，全长1749 bp，且具有典型的GH3特征结构域，不具跨膜域，不存在信号肽，属于不稳定蛋白；PCR扩增后得到约1 800 bp大小的片段，经凝胶过滤色谱纯化，最终得到基于蛋白印迹实验(Western blotting)验证正确的66 200大小的重组蛋白。结论 首次克隆并分析了温郁金JAR基因，纯化了JAR5蛋白，为进一步研究温郁金JAR基因蛋白功能研究提供依据。
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