褪黑素抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖

作者：唐杨; 刘川; 康华利; 晋军^*

来源：第三军医大学学报, 2021, 43(17): 1619-1626.

DOI：10.16016/j.1000-5404.202103139

• 动脉粥样硬化
• 血管平滑肌细胞
• 褪黑素
• 氧化型低密度脂蛋白
• 增殖

目的观察褪黑素(melatonin, Mel)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖功能的影响并探讨其可能的分子机制。方法 (1)选用不同浓度(0、10、20、50、100μg/mL)的ox-LDL诱导VSMCs 48 h后检测细胞增殖功能,观察各浓度ox-LDL对VSMCs功能的影响。(2)选择最佳浓度(50μg/mL)的ox-LDL诱导VSMCs 0、6、12、24、48 h后检测细胞增殖功能,观察各时间点ox-LDL对VSMCs功能的影响。(3)50μg/mL的ox-LDL诱导VSMCs 24 h后,再用1、1×103、1×105、1×106 nmol/L的Mel处理VSMCs 48 h,观察Mel作用不同时间对VSMCs增殖功能的影响。(4)使用ox-LDL联合Mel处理VSMCs。实验分4组:空白对照组(VSMCs正常培养不进行任何处理),Mel组(1×105 nmol/L Mel处理VSMCs 48 h),ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL诱导VSMCs 24 h),ox-LDL+Mel组(使用50μg/mL的ox-LDL诱导VSMCs 24 h后,接着使用1×105 nmol/L的Mel处理VSMCs 48 h)。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色和Western blot检测增殖标记物(PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞周期素A(Cyclin A)、细胞周期抑制蛋白p21以及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路相关蛋白表达。结果与空白对照组比较,50μg/mL ox-LDL处理VSMCs 24 h能显著诱导细胞增殖,经ox-LDL(50μg/mL)诱导24 h后,S期与G1期细胞显著增加,G2期细胞显著减少,促进细胞迁移,上调PCNA、α-SMA、Cyclin A、p-ERK1/2蛋白表达,并下调p-p21蛋白水平,差异均具有统计学意义(P<0.01)。1、1×103、1×105、1×106 nmol/L Mel均可不同程度抑制ox-LDL诱导的VSMCs增殖,与ox-LDL组比较,ox-LDL(50μg/mL)处理VSMCs 24 h后接着使用Mel(1×105 nmol/L)处理48 h,可使G1期与S期细胞显著减少,G2期细胞显著增加,降低PCNA、α-SMA、Cyclin A、p-ERK1/2蛋白表达,上调p-p21蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 Mel可显著抑制ox-LDL诱导的VSMCs的增殖,其作用机制可能与激活P21、阻断ERK1/2信号通路相关。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 第三军医大学