UBE2T对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响及机制研究

作者：吴琼; 郑志存^*

来源：现代检验医学杂志, 2022, 37(02): 115-125.

• 肝癌
• 泛素结合酶E2T
• PI3K-AKT信号通路

目的 通过检测肝癌组织中泛素结合酶E 2T(ubiquitin binding enzyme E2T, UBE2T)表达，探究其对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响及其潜在分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR实验（qRT-PCR）检测50例临床肝癌组织及其癌旁正常组织中UBE2T相对表达量；通过转染靶向UBE2T基因的shRNA干扰慢病毒载体GV248-shUBE2T-1,GV248-shUBE2T-2及阴性对照GV248-NC至肝癌HepG2细胞，构建UBE2T基因稳定干扰细胞系，并验证其转染敲降效率；采用细胞增殖实验、克隆形成实验及细胞周期实验分别检测敲低UBE2T表达对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响；蛋白免疫印迹实验检测PI3K/AKT信号通路关键靶基因PI3K和AKT磷酸化水平。结果 临床50例肝癌组织中UBE2T相对表达量为2.012±0.489，显著高于癌旁正常组织的1.102±0.533，差异有统计学意义（t=8.896,P<0.01）。与阴性对照组（1.000±0.001）相比，转染干扰慢病毒载体的shUBE2T-1组（0.201±0.003）和shUBE2T-2组（0.246±0.005）中UBE2T表达明显降低，差异有统计学意义（F=518.800,P <0.001）。shUBE2T-1组（0.392±0.028）和shUBE2T-2组（0.368±0.026）细胞增殖速率明显低于对照组（0.519±0.031），差异有统计学意义（F=24.477,P=0.001）;shUBE2T-1组（5.018±0.521）和shUBE2T-2组（5.906±0.485）细胞克隆形成速率明显低于对照组（9.312±0.479），差异有统计学意义（F=62.819,P<0.001），并将细胞周期显著阻滞在G1期。shUBE2T-1组和shUBE2T-2组细胞中PI3K磷酸化水平为0.285±0.030和0.267±0.029,AKT磷酸化水平为0.454±0.037和0.411±0.039，均分别低于对照组的1.005±0.026和1.004±0.031，差异有统计学意义（F=659.930, 255.517,均P<0.001），但其本底表达保持不变。结论 肝癌中UBE2T显著高表达，其可能通过诱导PI3K,AKT的磷酸化进而参与调控PI3K-AKT信号通路来促进肝癌细胞增殖。