非洲猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作者：吴亚楠; 朱潇静; 周博伦; 张博; 刘晴晴; 郑兰兰^*; 魏战勇^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(05): 888-896.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.05.03

• 非洲猪瘟病毒
• P72基因
• TaqMan实时荧光定量PCR

建立一种TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)保守结构蛋白P72基因的检测。参照GenBank登录的ASFV P72相关基因序列,设计合成1对特异性引物与1个TaqMan探针,通过对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ASFV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,对该方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结果显示,该方法能有效扩增1.0×100～1.0×109拷贝/μL ASFV-P72标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系;检测灵敏度为1.0×100拷贝;对猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等病原不发生交叉反应;重复性试验结果显示变异系数(CV)小于1%。结果表明,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于临床样本中ASFV的检测,从而更好地对ASF疫情进行监测和诊断。

• 单位
  河南农业大学