共表达人μ阿片受体与Gq蛋白的稳定细胞株的建立及功能鉴定

作者：石晶晶; 张毅; 陈学军; 朱思庆; 王陈; 李丽琴^*

来源：实验技术与管理, 2023, 40(05): 24-30.

DOI：10.16791/j.cnki.sjg.2023.05.004

• μ阿片受体
• G蛋白耦联受体
• 钙离子
• 实时荧光检测分析系统
• DAMGO

建立共表达人μ阿片受体（humanμ-opiatereceptor,hMOR,OPRM）与Gq蛋白的CHO-Flp In稳定细胞模型，并鉴定其药理学功能，可为体外高通量筛选靶向OPRM的药物奠定基础。该研究首先构建重组表达质粒OPRM-pcDNA5/FRT，并进行鉴定；然后通过脂质体转染法将OPRM-pcDNA5/FRT、GqG66Di5-pIRES/puro3和FLP重组酶质粒POG44共转染CHO-Flp In细胞，经抗性加压和有限稀释法挑取耐药单克隆，采用FLIPR钙信号检测方法筛选阳性克隆株；最后，通过RT-q PCR对细胞中的OPRM和GqG66Di5m RNA表达水平进行检测，并选用OPRM激动剂DAMGO和抑制剂Naloxone对稳定细胞株的药理学功能进行鉴定。结果显示：经酶切确定了重组质粒的正确构建；通过重组质粒转染、抗生素加压筛选以及钙信号测定获得22个具有活性的克隆细胞株，其中15号细胞株的荧光信号值最高，命名为Gq-OPRM1-CHO；与对照组相比，Gq-OPRM1-CHO细胞组中OPRM与GqG66Di5基因m RNA水平分别升高约400倍和120倍；在Gq-OPRM1-CHO细胞中，FLIPR钙信号检测激动剂DAMGO的EC50为0.02±0.002μmol/L，抑制剂Naloxone的IC50为0.04±0.003μmol/L。该研究成功建立了OPRM与GqG66Di5蛋白稳定共表达的细胞模型Gq-OPRM1-CHO，该细胞株具有对OPRM激动剂和拮抗剂特异性反应的药理学功能。