鸽Beclin 1基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

作者：李铭; ***; 胡敏; 张奕婷; 刘爽

来源：中国家禽, 2018, 40(17): 13-16.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2018.17.003

• 王鸽
• Beclin 1
• 基因克隆
• 原核表达
• 多克隆抗体

为了更好地理解自噬与禽类某些疾病的发生关系,研究制备了自噬重要标志性蛋白Beclin 1的多克隆抗体。首先克隆了鸽Beclin 1基因的部分保守序列,运用基因重组方法构建了pET52b-beclin 1原核表达载体,IPTG诱导后得到重组表达蛋白,采用镍柱纯化法得到目标蛋白。SDS-PAGE结果显示,所得到的目标蛋白分子量与预测值一致,表明纯化得到了高纯度目标蛋白。以目标蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,5免后制备抗血清。ELISA结果显示效价为1∶20 000,Western blot显示抗体具有良好的特异性。结果为检测自噬相关禽类疾病的发生中Beclin 1基因的蛋白表达提供了必要的抗体基础。

• 单位
  生物工程学院; 大庆师范学院