沉默PHB减弱缺氧诱导的神经母细胞瘤自噬与增加顺铂化疗敏感性

作者：刘英华; 黄也茜; 马俊梅; 夏梦; 蒋文军; 尹艳桃^*

来源：中华小儿外科杂志, 2023, 44(12).

• 神经母细胞瘤
• 抗增殖蛋白
• 缺氧
• 自噬

目的探讨抗增殖蛋白(prohibitin, PHB)对缺氧诱导的神经母细胞瘤自噬及顺铂化疗敏感性的影响。方法体外培养SH-SY5Y和SK-N-SH细胞系, 取对数期生长的细胞进行后续实验。分别转染sh-NC和sh-PHB到细胞中, 采用RT-qPCR检测PHB的mRNA表达水平验证转染成功。缺氧处理后, 分别用不同剂量(0、5 μM、10 μM、25 μM、50 μM和100 μM)的顺铂处理细胞。CCK-8试剂盒检测各组细胞活性;Western blot检测细胞中Beclin1、LCⅡ/LCⅠ、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平。采用SPSS 22.0软件包进行单因素方差分析或Student’’st检验分析。结果和对照组比较, RT-qPCR和Western blot检测结果显示缺氧组中SH-SY5Y和SK-N-SH细胞中PHB的表达水平显著上调。转染sh-PHB后, RT-qPCR结果证实sh-PHB组中PHB的mRNA表达水平显著下调。Western blot结果显示和control组比较, Hypoxia组Beclin1的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著上调, 然而和Hypoxia+sh-NC组比较, Hypoxia+sh-PHB组中Beclin1的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著下降。此外, CCK-8结果显示和Hypoxia+sh-NC组比较, Hypoxia+sh-PHB组中顺铂处理后细胞活性明显下降, 提示顺铂敏感性增加。流式细胞术检测结果显示, 和Hypoxia+sh-NC+Cisplatin组比较, Hypoxia+sh-PHB+Cisplatin组中凋亡水平显著增加。Western blot结果表明, 和Hypoxia+sh-NC+Cisplatin组比较, Hypoxia+sh-PHB+Cisplatin组中caspase-3和Bax蛋白表达水平显著上调, Bcl-2蛋白表达水平下降。结论沉默PHB可以抑制缺氧诱导的神经母细胞瘤自噬, 同时增加顺铂化疗敏感性

• 单位
  四川大学; 四川省医学科学院·四川省人民医院; 四川省医学科学院（四川省人民医院）; 四川省医学科学院(四川省人民医院)