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摘要
大豆Glyma03g263000基因编码1个RING-H2 zinc finger蛋白，其表达水平受大豆胞囊线虫侵染影响。为促进该基因在抗线虫研究中的应用，利用生物信息学和PCR方法对该基因序列进行分析，并从抗病大豆品种中克隆基因CDS区。构建pET30a-Glyma03g263000原核表达载体，转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中，并诱导Glyma03g263000蛋白表达，设置不同菌液浓度、IPTG浓度、温度及诱导时间，并采用SDS-PAGE电泳方法进行检测，分析诱导该蛋白表达的较好条件。结果显示：Glyma03g263000基因编码260个氨基酸，蛋白分子质量为27.88 kDa,在102～145个氨基酸区间具有1个RING保守结构域。温度是影响该蛋白表达的主要因素。该蛋白是不溶于水的包涵体蛋白，经变性裂解等试剂处理后可获得纯化蛋白。研究结果为Glyma03g263000蛋白的功能分析奠定了理论及材料基础。
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