SHP2抑制剂PHPS1对 ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块及巨噬细胞的影响

作者：于芳; 马香书; 霍丽静; 赵培; 马倩; 于悦卿; 路永刚; 帖彦清

来源：河北医药, 2020, 42(24): 3697-3707.

• 动脉粥样硬化
• PHPS1
• Syk
• 巨噬细胞

目的研究SHP2抑制剂PHPS1对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块及巨噬细胞的影响。方法体内实验:将ApoE-/-小鼠随机分成模型组和PHPS1组,每组10只,并给予高脂饲料喂养,模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液3 mg·kg-1·d-1,PHPS1组腹腔注射PHPS1剂量3 mg·kg-1·d-1,注射1次/d,注射20 d。通过Movat染色分析斑块面积;通过天狼星红染色分析胶原所占比例;通过免疫组化分别分析巨噬细胞与平滑肌细胞的表达量;通过Western Blotting检测p-SHP2、p-Syk、CD36蛋白磷酸化水平。体外实验:将小鼠巨噬细胞RAW246.7细胞培养于DMEM培养基中,将其分为RAW246.7组(未做其他任何处理的DEMD培养基)、RAW246.7+ox-LDL组(给予ox-LDL处理的DEMD培养基),RAW246.7+ox-LDL+PHPS1组(同时给予ox-LDL+PHPS1处理的DEMD培养基)。体外实验:将小鼠巨噬细胞RAW246.7细胞培养于DMEM培养基中,将其分为RAW246.7组(未做其他任何处理的DEMD培养基)、RAW246.7+ox-LDL组(给予ox-LDL处理的DEMD培养基),RAW246.7+ox-LDL+PHPS1组(同时给予ox-LDL+PHPS1处理的DEMD培养基)。通过免疫荧光检测细胞内CD36的表达量;通过荧光微球吞噬实验检测巨噬细胞的内吞能力;通过Western Blotting检测各组细胞中p-SHP2、p-Syk、CD36蛋白磷酸化水平。结果体内实验:Movat染色显示PHPS1组动脉粥样硬化斑块面积明显小于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);天狼星红染色显示,PHPS1组动脉粥样硬化斑块内胶原纤维的含量较模型组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示PHPS1组平滑肌细胞与巨噬细胞较模型组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blotting检测结果显示,PHPS1组p-SHP2、p-Syk、CD36蛋白的磷酸化水平较模型组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。体外实验:PHPS1组巨噬细胞内CD36的荧光强度明显低于ox-LDL组,差异有统计学意义(P<0.05);荧光微球吞噬实验结果显示PHPS1组巨噬细胞荧光强度明显低于ox-LDL组,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blotting检测结果显示,RAW246.7+ox-LDL+PHPS1组p-SHP、p-Syk、CD36蛋白磷酸化水平较RAW246.7组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SHP2抑制剂PHPS1通过抑制SHP2、Syk蛋白磷酸化水平,从而减少巨噬细胞内吞脂质脂质的作用,最终阻止动脉粥样硬化斑块的形成。

• 单位
  河北省人民医院