酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

作者：周希珍; 赵慧; 李晓峰; 邓永强; 秦成峰; 秦鄂德; 高岚

来源：Y201104030, 2011, 36(04): 382-384.

• 酵母双杂交
• 乙型脑炎病毒
• NS5蛋白 yeast two-hybrid system
• Japanese encephalitis virus
• non-structural protein 5

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选...

• 单位
  军事医学科学院; 生命科学学院; 兰州大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室