微RNA-146a反转牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜细胞成骨的抑制作用

作者：朱东望; 薛栋; 赖文; 徐万宁; 蒋少云^*

来源：中华口腔医学杂志, 2018, 53(11): 753-759.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1002-0098.2018.11.007

• 牙周炎
• 微RNAs
• 成骨分化
• 人牙周膜细胞

目的探讨微RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)成骨分化的影响及机制,为牙周组织工程学研究提供实验依据。方法体外培养hPDLC,诱导成骨分化,将细胞分为5组:含5%胎牛血清的α-微量伊格尔培养基培养的hPDLC (非成骨分化培养组);成骨分化液培养的hPDLC(成骨分化培养组);成骨分化液+1 mg/L Pg LPS处理的hPDLC(LPS组);成骨分化液+1 mg/L Pg LPS+miR-146a模拟物处理的hPDLC(LPS+miR-146a模拟物组);成骨分化液+1 mg/L Pg LPS+miR-146a阴性对照处理的hPDLC(LPS+miR-146a阴性对照组),每组设5个复孔。通过实时荧光定量PCR和茜素红染色法分别检测成骨标志物和矿化,同时应用非放射性转录因子检测hPDLC的核提取物中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的核活性。结果与成骨分化培养组相比,LPS组hPDLC中Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor-2,RUNX2)和骨钙蛋白水平显著降低(P<0.05); Pg LPS可以抑制矿化能力,刺激NF-κB p65的核转录活性的表达(成骨分化培养组:1.023±0.217,LPS组:6.252±0.613,P=0.008);与LPS+miR-146a阴性对照组相比,LPS+miR-146a模拟物组第3天检测到hPDLC中除ALP(P=0.167)和RUNX2(P=0.580)外,Ⅰ型胶原(P=0.007)和骨钙蛋白mRNA(P=0.049)的表达均显著增加;第7和14天时Ⅰ型胶原、ALP、RUNX2和骨钙蛋白mRNA水平均显著增加(P<0.05),并可以增强矿化能力,同时miR-146a模拟物可显著降低Pg LPS诱导的hPDLC中NF-κB p65的核转录活性(LPS+miR-146a模拟物组:2.427±0.354; LPS+miR-146a阴性对照组:5.863±0.482,P=0.019)。结论 miR-146a可以通过促进hPDLC中成骨标志物的表达和抑制炎症通路,逆转Pg LPS对hPDLC成骨分化的抑制作用。

• 单位
  首都医科大学宣武医院; 四川大学华西口腔医院; 口腔疾病研究国家重点实验室; 北京大学深圳医院; 天津医科大学口腔医院