水牛bFGF基因的克隆、逆转录病毒载体的构建和鉴定

作者：农恬颖; 杨小玲; 崔佳瑜; 杨素芳; 朱鹏; 石德顺; 邓彦飞

来源：中国科技论文, 2017, 12(18): 2086-2091.

• 生物化学及分子生物学
• 水牛
• 碱性成纤维细胞生长因子
• 克隆
• 真核表达

对水牛碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因进行克隆、序列分析,构建bFGF表达载体,为其在水牛干细胞中的功能研究奠定基础。以水牛胎儿组织为材料提取总RNA,利用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)克隆得到的bFGF基因编码区序列,进行生物信息学分析,构建表达bFGF的逆转录病毒载体(pMXs-bFGF-IRESGFP),并在293T细胞和水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblast,BFF)上进行重组载体表达鉴定。结果表明,水牛bFGF基因编码区全长468bp,编码155个氨基酸,含有纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)家族特有的蛋白结构;逆转录病毒载体介导的bFGF基因能在293T细胞和BFF中表达。本研究克隆出水牛bFGF编码序列,构建的逆转录病毒载体能在不同真核细胞中表达bFGF。

• 单位
  广西大学; 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室