番茄分裂泛素酵母双杂膜系统cDNA文库及SlToc159诱饵载体的构建

作者：王琪; 闫见敏; 岳江; 李云洲; 须文

来源：植物生理学报, 2022, 58(05): 825-834.

DOI：10.13592/j.cnki.ppj.100063

• 番茄
• 分裂泛素酵母双杂交系统
• cDNA文库
• Gateway技术
• 叶绿体外膜转运蛋白
• SlToc159
• 诱饵载体

叶绿体是植物进行光合作用、脂质代谢以及氨基酸合成的重要场所。叶绿体自身基因组编码的蛋白质仅有100个左右,其余95%（约3 000多个）的叶绿体蛋白质即前体蛋白是由细胞核基因组编码的,在细胞质中翻译后通过TOC-TIC转运蛋白复合体导入叶绿体的特定位置而发挥生物学功能。Toc159是叶绿体外膜转运蛋白,主要负责转运初始阶段前体蛋白的特异性识别。为研究番茄SlToc159与前体蛋白的互作机制,本试验以‘Alisa Craig’番茄为材料,提取番茄幼苗叶片总RNA,采用Gateway技术构建分裂泛素化膜系统cDNA文库,同时构建诱饵载体pBT3-N-Toc159AGM和pBT3-N-Toc159GM,并用营养缺陷法检测其自激活活性。文库质量检测结果显示,文库总容量为1.6×10～7 CFU,文库滴度为4.0×10～6 CFU·mL-1,外源基因插入片段为750～2 000 bp,重组率为100%,符合后续筛选互作蛋白的cDNA文库要求。酶切及测序结果表明,诱饵载体pBT3-N-Toc159AGM和短截A区的pBT3-N-Toc159GM构建成功,能够在分裂泛素化系统中正确表达且无自激活活性。本研究结果为番茄膜蛋白利用酵母双杂交筛选互作蛋白提供参考与理论基础。

• 单位
  贵州大学